Всем привет! Есть ли в чате кто то кто работал с Coenzyme A? Мне нужно приготовить стоковый раствор, пытаюсь найти информацию в интернете и пишут разное: где-то пишут, что нужно приготовить single use аликвоты в воду, но другой источник говорит, что он вообще в воде неустойчив (замораживать нельзя) - нужно обязательно за день использовать. Проблема в том, что концентрация в конечном растовре небольшая (да и объем) поэтому если готовить каждый раз заново - непонятно, как такие маленькие навески делать. Если кто-то работал с CoA и может поделиться опытом буду очень рада!

Всем привет. Вдруг кто в курсе. У нас есть два фермента: бета галактозидаза у E.coli и бета галактозидаза у мыши, которые по ген.данным не гомологичны. Мы купили антитела, которые специфичны к бактериальной галактозидазе и красим ими срезы мозга (наши мыши нокауты со вставкой гена бактериальной галактозидазы под промоутер белка интереса). Какова вероятность, что будет происходить не специфическое связывание этих антител с мышиной галактозидазой? ThermoFisher (у них покупали антитела) говорит, что не должно, по статьям к этим антителам - не должно, банально по логике не должно, иначе нет смысла в том, чтобы их вообще использовать. Но меня уверяют, что ферменты поликлоны, а антитела связываются с третичной структурой белка. Как-нибудь по базам данным такую возможность можно проанализировать?

Антитела ведь только экспериментально проверять. И все ж промотор

даже если негомологичные бетогалактазидазы имеют похожий фолд (что вряд ли), вероятность того, что у них совпадает какой-то эпитоп не выше, чем у двух других случайных белков. Другое дело, что антитела вообще часто красят неспецифично, и надо подбирать условия. Есть  ли данные, что эти антитела уже использовали успешно для ИГХ?

С третичной-то да, но конкретные остатки очень важны, если они не совпадают - не будет связывания. Думаю, вероятность кросс-специфичности исчезающе низкая в этом случае

Да, достаточно много.

https://www.thermofisher.com/antibody/product/beta-Galactosidase-Antibody-Polyclonal/A-11132

Но только в одной статье была одна картинка с диким типом в контроле. Там был небольшой фон, но в целом эти антитела активно используют. Отправила наш протокол в компанию, чтобы обсудить, есть ли какие-то специфичные условия. Но сам факт, что мне упорно досказывают кросс-реакцию антител, навёл на необходимость искать информацию

Думаю, что контроль на обычной мыши без нокаута снимет все вопросы. А логика тех, кто вам доказывает кросс-реакцию, очень странная.

Дело в том, что мы нашли в таком контроле окрашивание. И мне говорят, что это нормально и ожидаемо, с чем я категорически несогласна. Причём более того, это не специфическое окрашивание хотят использовать как внутренний положительный контроль, что антитела работают.

А лизаты колей-то красятся? 😁

И аргументируют исключительно: антитела связываются с третичной структурой, у них она одинаковая, так что вот. Поэтому хочу найти информацию, что нет - разная, чтобы аргументировать свою точку зрения.

Наверное еще хорошо положительный контроль. Отрицательный контроль использовать как положительный странно. Кросс-реакция может быть и часто бывает, но не обязательно с галактозидазой.

Не пробовали, потому что у нас их нет🙈
Контроль вторичных антител выявил, что не в них дело.

По последовательности бактериальная галактозидаза на мышиную совершенно не похожа, но немного перекрывается с последовательностями глюкуронидазы и маннозидазы. Если эпитоп где-то в участке перекрытия, но мб и кросс-специфичность будет с ними, но надо чекать отдельно это

Спасибо огромное! Сейчас посмотрю

Кстати, по поводу взаимного признания сертификатов https://tass.ru/mezhdunarodnaya-panorama/11853123

Привет! А кто-нибудь слышал про случаи, когда не вырабатывались антитела в ответ на спутник? (Спутник, согласно сертификату, который выдал госуслуги). Я понимаю, что это может быть индивидуальная реакция организма (иммуносупрессоры в период вакцинации не принимались). Сейчас интересно, есть ли смысл и возможность ставить другую вакцину? Если я правильно понимаю, Спутник в описанном случае уже не подходит, так?

Про ковивак слышал, про спутник нет

ЕС довольно много что предлагает РФ

Ага, при этом сами сегодня призывали не признавать российские вакцины

Было даже, что не выработались после двух доз, а после ревака первым компонентом появились. Да, случается, что нет антител, но если сильно плохо не было, можно попробовать еще разок Спутник сделать. Ну либо ковивак. После него, правда, аж у половины людей антител нет:)