Господа, тут кто-нибудь наверняка пользовались Гибсоновской сборкой. Я тут в статье встретила руководство лигировать фрагменты в большом объёме (>1 мл), но при этом используя всё те же 10 мкл Гибсоновского мастер-микса, "to favour intra-molecule ligation". По-моему, лажа какая-то -- 10 мкл ферментов, предназначенных для 20 мкл конечной реакционной смеси, в миллилитре разводить. Можете прокомментировать, пожалуйста?
Я не настоящий сварщик, и гибсона не делал никогда, но... Вот полимеразы я на 50 мкл реакции кладу 0.5 мкл, т.е. она стократная. Даже по инструкции. Про вещи типа BigDye и не говорю, их из экономии разводят в пять раз от заявленного, и всё секвенируется. Так что не очень плохо выглядит.
Попробуй и так и так. Или не хватает ни на что?