Size: a a a

2021 April 08

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Сначала выделяли ДНК, потом пцрили участок длиной 230 bp, отправляли на рестрикцию. На рестрикции у части пациентов обнаружили бэнд, по длине похожий на результат того, что рестрикционный сайт внутри фрагмента ПЦР был нарушен. Отсеквенировали весь фрагмент - всё в порядке, никакой мутации.
источник

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Выделяли ДНК из цельной крови
источник

IF

Ilya Flyamer in Science FYI
Ага, интересно, спасибо. По рестрикции прямо гомозиготная потеря сайта получалась?
источник

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Гетерозиготная
источник

IF

Ilya Flyamer in Science FYI
Ок, а на хроматограмму посмотрели в этом месте, точно нет второго пика у одного из нуклеотидов?
источник

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Да, конечно) смотрели в Mutation Surveyor, пики как назло отличные и однозначные что в F, что в R
источник

IF

Ilya Flyamer in Science FYI
Вы ПЦР продукт чистите перед резкой?
источник

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Да
источник

IF

Ilya Flyamer in Science FYI
Гетерозиготная пропажа сайта на геле может быть из-за частичной резки, если слишком много ДНК, или неоптимальные условия... Пробовали повторить резку на всякий случай?
источник

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
4 раза повторяла + ещё у 76 пациентов всё нормально
источник

IF

Ilya Flyamer in Science FYI
а секвенирование повторяли?
источник

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Ещё нет, вот надо бы конечно, но мы в 2 повторностях делали
источник

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Думаю повторить + попытаться что-то достать из геля
источник

IF

Ilya Flyamer in Science FYI
Я бы еще попробовал другие праймеры
источник

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Спасибо, тоже попробую)
источник

G

German in Science FYI
Один из моих любимых генов
источник

G

German in Science FYI
Очередной тупой вопрос от меня - а нарушение как то коррелировало с возрастом или химиотерапией доноров днк?
источник
2021 April 09

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Нет и нет(( даже разные диагнозы
источник

G

German in Science FYI
ДНК из крови? Все пожилые?
источник

EK

Elizaveta Kulaeva in Science FYI
Тоже люблю, особенно r882h мутацию
источник