Эм.
Наверное, не в тему.
Но можно протокол в студию? И строгость его выполнения?
В прошлой лабе была ситуация, когда аспирантка теряла 90% ДНК при очистке гелем. Перепробовала все киты. У других людей все работало.
Стала добавлять в 2 раза больше буфера для растворения геля - и дело пошло о_О
Прошу прощения, что так долго. Протокол выполнялся вначале со 100% строгостью. Затем с изменениями. Вариант с изменениями:
1. Вырезание участка геля с искомым бандом в предвзвешенную пробирку
2. Взвешивание
3. + 3 объема связывающего раствора
4. Прогрев при 55 С до полного растворения агарозы.
5. Добавление равного весу геля объема изопропанола (ибо фрагмент больше 4 т.п.н.)
6. Тщательно, но быстро вортексировать
7. На колонку и крутануть 1000 g, 30 сек. Отобрать фильтрат и опять нанести на колонку
8. Повторить 7 трижды.
9. Промыть дважды 700 мкл промывочного раствора (центрифугирование 16000 g, фильтрат отбросить).
10. Крутануть 16000 g 2 минуты для удаления промывочного раствора.
11. Посушить 5 мин для испарения остатков спирта
12. В центр мембраны не касаясь типсом налить 30 мкл элюирующего буфера, инкубировать 3 мин
13. Крутануть 16000 g 3 мин, фильтрат заново нанести на колонку и повторить.
Вот и весь протокол.
З.ы.: ....так я тоже аспирант 😄