VM
+можно же публиковать какие-то измышления не выдающие тайну... всякие ревью трендов там...
Ну да, я как раз нечто подобное пишу сейчас в свободное время
Size: a a a
2020 June 18
LA
Думаю, в Иркутск из мск всяко быстрее будет. Да и дешевле сильно квагенов))
Ну, решили всё-таки промегу попробовать)
Кайаджен выжимал из геля 90% того, что грузили.
А вот евроген - 90% пролетает мимо колонки.
Кайаджен выжимал из геля 90% того, что грузили.
А вот евроген - 90% пролетает мимо колонки.
PD
помогите пожалуйста
V
Смываю с мембраны 7 нг 😂😂😂
мысль в сторону: сколько нужно для лигирования? опыт показал, что меньше-лучше (видимо из конкатенации), долго мучался перегружая...
не помню, сколько закидывал на гель, но доставал вроде тоже нанограммы...
не помню, сколько закидывал на гель, но доставал вроде тоже нанограммы...
V
а так с китами только играть на загрузочном буфере с учетом размера фрагмента (смотри инструкцию квиагена)
V
и, как советовали, горячо и с бубном элюировать, если фрагмент крупный
O
мысль в сторону: сколько нужно для лигирования? опыт показал, что меньше-лучше (видимо из конкатенации), долго мучался перегружая...
не помню, сколько закидывал на гель, но доставал вроде тоже нанограммы...
не помню, сколько закидывал на гель, но доставал вроде тоже нанограммы...
Не то чтобы меньше-лучше. По опыту, 100нг вектора оптимально. Количество вставки рассчитывается соответствующе
LA
а так с китами только играть на загрузочном буфере с учетом размера фрагмента (смотри инструкцию квиагена)
Дык и так пробовал) фрагмент 5200 п.н.
O
Ну, решили всё-таки промегу попробовать)
Кайаджен выжимал из геля 90% того, что грузили.
А вот евроген - 90% пролетает мимо колонки.
Кайаджен выжимал из геля 90% того, что грузили.
А вот евроген - 90% пролетает мимо колонки.
Просто по нашему опыту, частицы почти всегда выход выше дают, чем колонки
V
Не то чтобы меньше-лучше. По опыту, 100нг вектора оптимально. Количество вставки рассчитывается соответствующе
вектора очищенного уже? хм...
LA
Не то чтобы меньше-лучше. По опыту, 100нг вектора оптимально. Количество вставки рассчитывается соответствующе
Угу. Только чтобы засунуть 100 нг фрагмента в 10 мкл рабочего раствора на лигирование нужно чтобы концентрация фрагмента была хотябы 30 нг/мкл...
O
вектора очищенного уже? хм...
Да. Того, что в лигирование добавляешь. Прям чтобы гарантировано результат был
O
Угу. Только чтобы засунуть 100 нг фрагмента в 10 мкл рабочего раствора на лигирование нужно чтобы концентрация фрагмента была хотябы 30 нг/мкл...
Ну да. Но с вектором у меня во всяком случае проблем не было. То есть, спокойно и по 50-60 нг/мкл было
LA
Промеганскую лигазу юзаем. Работает отлично, но вот такие ограничения.
LA
Ну да. Но с вектором у меня во всяком случае проблем не было. То есть, спокойно и по 50-60 нг/мкл было
Ну вот) а я с геля смываю 7 нг фрагмента и собсно каюк(
V
я узал небовскую и во-первых советую считать в молях
LA
Поправка 7 нг/мкл в 30 мкл, и довольно грязно.
O
Промеганскую лигазу юзаем. Работает отлично, но вот такие ограничения.
У нас кста, чет промеговские реактивы не прижились. Обычно термофишер юзаем. Ну, и небовские хорошие
V
а во-вторых норовил закинуть больше и вектора, и вставки, и клонирование умирало совсем. А меньше норм...
LA
Но! Попытавшись это почистить и сконцентрировать теряю все 😂